Logo BSU

Please use this identifier to cite or link to this item: https://elib.bsu.by/handle/123456789/185443
Title: Оптимизация условий очистки и рефолдинга рекомбинантного эфрина-А5 из телец включения Escherichia coli
Other Titles: Optimizing purification and refolding conditions of the recombinant ephrin-A5 from inclusion bodies of Escherichia coli / A. V. Zhydzetski, M. V. Sholukh, J. R. Hannemann, R. Handrick, Z. V. Motylevich, J.-P. Himanen
Authors: Жидецкий, А. В.
Шолух, М. В.
Ханнеман, Ю. Р.
Хандрик, Р.
Мотылевич, Ж. В.
Химанен, Ю.-П.
Keywords: ЭБ БГУ::ЕСТЕСТВЕННЫЕ И ТОЧНЫЕ НАУКИ::Биология
Issue Date: 2017
Publisher: Минск : БГУ
Citation: Журнал Белорусского государственного университета. Биология = Journal of the Belarusian State University. Biology . - 2017. - № 2. - С. 58-65
Abstract: В результате настоящего исследования разработана методика выделения, очистки и рефолдинга рекомбинантного эфрина-А5 из телец включения Escherichia coli. В основу легли спектрофотометрические, электрофоретические, хроматографические методы, а также рефолдинг методом разведения и на матрице аффинного сорбента. Благодаря оптимизации условий отмывки и солюбилизации телец включения установлены составы отмывочных и солюбилизирующего растворов, позволяющие наиболее полно избавиться от примесных соединений с наименьшими потерями целевого белка, а также провести полную экстракцию целевого белка из растворенных телец включения. В процессе концентрирования и очистки рекомбинантного эфрина-А5 из солюбилизата телец включения c применением металл-хелатной хроматографии на Ni-сефарозе удалось получить целевой продукт чистотой 70,3  7,4 % перед проведением рефолдинга. В результате скрининга основных характеристик рефолдинг-буфера для ренатурации рекомбинантного эфрина-А5 была выбрана следующая система: 20 ммоль/л трис-HCl; pH 8; 50 ммоль/л сахарозы; 2,5 ммоль/л DTT; 50 ммоль/л NaCl с конечной концентрацией эфрина-А5 в ренатурирую-щей системе до 20 мкг/мл и разведением в 10 раз. = The paper is devoted to isolation, purification and development of refolding approach of the recombinant ephrin-A5 out of Escherichia coli inclusion bodies which corresponds to the aim of the research. The main methods applied are UV/visible spectroscopy, protein electrophoresis, column chromatography, refolding by dilution and matrix-assisted renaturation. Composition of the washing and solubilizing solutions was established as a result of washing and solubilizing conditions optimization allowing to get rid of impurities and minimize loss of the target protein as well as carry out the protein extraction out of inclusion bodies. The protein of interest with 70.3  7.4 % purity was managed to obtain in conducting concentration and purification of the solubilized recombinant ephrin-A5 with the help of immobilized metal affinity chromatography on Ni-sepharose. Following refolding system containing 20 mmol/l Tris-HCl; pH 8; 50 mmol/l sucrose; 2.5 mmol/l DTT; 50 mmol/l NaCl with the final protein concentration up to 200 mkg/ml and 10-fold dilution was chosen as the best during the main refolding buffer characteristics screening.
URI: http://elib.bsu.by/handle/123456789/185443
ISSN: 2521-1722
Licence: info:eu-repo/semantics/openAccess
Appears in Collections:2017, №2

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
58-65.pdf906,34 kBAdobe PDFView/Open
Show full item record Google Scholar



PlumX

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.