Logo BSU

Please use this identifier to cite or link to this item: https://elib.bsu.by/handle/123456789/211223
Full metadata record
DC FieldValueLanguage
dc.contributor.authorПрокулевич, В. А.-
dc.contributor.authorСовгир, Н. В.-
dc.contributor.authorПотапович, М. И.-
dc.contributor.authorФайбич, А. Н.-
dc.contributor.authorГоленченко, С. Г.-
dc.contributor.authorКудин, К. В.-
dc.contributor.authorКудина, И. В.-
dc.date.accessioned2018-12-17T09:38:50Z-
dc.date.available2018-12-17T09:38:50Z-
dc.date.issued2015-
dc.identifier.other№ госрегистрации 20141797ru
dc.identifier.urihttp://elib.bsu.by/handle/123456789/211223-
dc.description.abstractОбъектом исследования является нуклеотидная последовательность гена эскулентина-1b из базы данных GenBank Национального центра биотехнологической информации последовательностей (код доступа X77833). Цель работы – клонирование гена антимикробного пептида эскулентина и изучение особенностей его экспрессии в клетках бактерий E. coli в составе химерных генетических последовательностей, кодирующих фьюжн-белки. Основными методами исследования являются: биоинформатические, молекулярно-биологические, генетические и микробиологические. В процессе работы использовались следующие приборы: амплификатор, системы для проведения электорофореза нуклеиновых кислот и белков, центрифуги, термостатируемые перемешивающие бани, холодильники, лабораторные весы, аналитические весы, сухожаровые шкафы, автоклав, орбитальные термостатируемые шейкеры, система гель-документации, спектрофотометр, автоматический секвенатор. В результате работы разработаны праймеры для синтеза гена антимикробного пептида эскулентина-С, а также праймеры для получения химерных генетических последовательностей, включающих структурную часть гена эскулентина, сшитую с генами, детерминирующими синтез антивирусного (бычий альфа-интерферон) и антистафилококковых (эндолизин стафилококкового бактериофага К и его CHAP домен, а также эндолизин с гистидиновой меткой) белков. Химерные гены клонированы в составе стабильно наследуемых векторных систем бактерий E. coli, проведено их секвенирование и определена первичная последовательность соответствующих генов. Проведена индукция экспрессии всех клонированных генов в клетках бактерий штаммов E. сoli серии BL21 (E. сoli BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL, E. coli BL21(DE3) и E. coli BL21(DE3)pLysS), в результате которой установлено внутриклеточное накопление только тех фьюжн-белков, в которых эскулентин находится на N-конце молекул, но в то же время выявлено, что экспрессия сопровождается падением оптической плотности культуры штамма-продуцента, обусловленным лизисом бактериальных клеток и постепенным востановлением параметров роста к окончанию индукции. Данные подтверждены определением числа жизнеспособных клеток штаммов-продуцентов фьюжн-белков. Также установлено, что самый высокий уровень экспрессии характерен для белка, в котором фьюжн-пертнером эскулентина выступает эндолизин стафилоккоккового бактериофага К, меченный гистидиновыми остатками, по размеру на порядок превосходящий эскулентин и эффективно формирующий тельца включения. Кроме того, штамм E. сoli BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL как продуцент данного фьюжн-белка характеризуется наилучшими показателями роста культуры на протяжении индукции экспрессии гибридного гена. Турбидиметрически определено наличие антибактериальной активности фьюжн-белка, состоящего из эскулентина и эндолизина стафилококкового бактериофага К с гистидиновой меткой.ru
dc.language.isoruru
dc.publisherМинск : БГУru
dc.subjectЭБ БГУ::ЕСТЕСТВЕННЫЕ И ТОЧНЫЕ НАУКИ::Биологияru
dc.titleКлонирование гена антимикробного пептида прудовой лягушки (Rana esculenta) и изучение особенностей его экспрессии в E. coli. ГПНИ «Фундаментальные основы биотехнологий», подпрограмма «Новые биотехнологии» : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель В. А. Прокулевичru
dc.typereportru
Appears in Collections:Отчеты 2015

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
отчет Прокулевич 20141797.doc56,42 MBMicrosoft WordView/Open
Show simple item record Google Scholar



Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.