Please use this identifier to cite or link to this item:
https://elib.bsu.by/handle/123456789/211223
Full metadata record
DC Field | Value | Language |
---|---|---|
dc.contributor.author | Прокулевич, В. А. | - |
dc.contributor.author | Совгир, Н. В. | - |
dc.contributor.author | Потапович, М. И. | - |
dc.contributor.author | Файбич, А. Н. | - |
dc.contributor.author | Голенченко, С. Г. | - |
dc.contributor.author | Кудин, К. В. | - |
dc.contributor.author | Кудина, И. В. | - |
dc.date.accessioned | 2018-12-17T09:38:50Z | - |
dc.date.available | 2018-12-17T09:38:50Z | - |
dc.date.issued | 2015 | - |
dc.identifier.other | № госрегистрации 20141797 | ru |
dc.identifier.uri | http://elib.bsu.by/handle/123456789/211223 | - |
dc.description.abstract | Объектом исследования является нуклеотидная последовательность гена эскулентина-1b из базы данных GenBank Национального центра биотехнологической информации последовательностей (код доступа X77833). Цель работы – клонирование гена антимикробного пептида эскулентина и изучение особенностей его экспрессии в клетках бактерий E. coli в составе химерных генетических последовательностей, кодирующих фьюжн-белки. Основными методами исследования являются: биоинформатические, молекулярно-биологические, генетические и микробиологические. В процессе работы использовались следующие приборы: амплификатор, системы для проведения электорофореза нуклеиновых кислот и белков, центрифуги, термостатируемые перемешивающие бани, холодильники, лабораторные весы, аналитические весы, сухожаровые шкафы, автоклав, орбитальные термостатируемые шейкеры, система гель-документации, спектрофотометр, автоматический секвенатор. В результате работы разработаны праймеры для синтеза гена антимикробного пептида эскулентина-С, а также праймеры для получения химерных генетических последовательностей, включающих структурную часть гена эскулентина, сшитую с генами, детерминирующими синтез антивирусного (бычий альфа-интерферон) и антистафилококковых (эндолизин стафилококкового бактериофага К и его CHAP домен, а также эндолизин с гистидиновой меткой) белков. Химерные гены клонированы в составе стабильно наследуемых векторных систем бактерий E. coli, проведено их секвенирование и определена первичная последовательность соответствующих генов. Проведена индукция экспрессии всех клонированных генов в клетках бактерий штаммов E. сoli серии BL21 (E. сoli BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL, E. coli BL21(DE3) и E. coli BL21(DE3)pLysS), в результате которой установлено внутриклеточное накопление только тех фьюжн-белков, в которых эскулентин находится на N-конце молекул, но в то же время выявлено, что экспрессия сопровождается падением оптической плотности культуры штамма-продуцента, обусловленным лизисом бактериальных клеток и постепенным востановлением параметров роста к окончанию индукции. Данные подтверждены определением числа жизнеспособных клеток штаммов-продуцентов фьюжн-белков. Также установлено, что самый высокий уровень экспрессии характерен для белка, в котором фьюжн-пертнером эскулентина выступает эндолизин стафилоккоккового бактериофага К, меченный гистидиновыми остатками, по размеру на порядок превосходящий эскулентин и эффективно формирующий тельца включения. Кроме того, штамм E. сoli BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL как продуцент данного фьюжн-белка характеризуется наилучшими показателями роста культуры на протяжении индукции экспрессии гибридного гена. Турбидиметрически определено наличие антибактериальной активности фьюжн-белка, состоящего из эскулентина и эндолизина стафилококкового бактериофага К с гистидиновой меткой. | ru |
dc.language.iso | ru | ru |
dc.publisher | Минск : БГУ | ru |
dc.subject | ЭБ БГУ::ЕСТЕСТВЕННЫЕ И ТОЧНЫЕ НАУКИ::Биология | ru |
dc.title | Клонирование гена антимикробного пептида прудовой лягушки (Rana esculenta) и изучение особенностей его экспрессии в E. coli. ГПНИ «Фундаментальные основы биотехнологий», подпрограмма «Новые биотехнологии» : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель В. А. Прокулевич | ru |
dc.type | report | ru |
Appears in Collections: | Отчеты 2015 |
Files in This Item:
File | Description | Size | Format | |
---|---|---|---|---|
отчет Прокулевич 20141797.doc | 56,42 MB | Microsoft Word | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.